支原体检测中，污染引发的假阳性是生物制品企业的痛点。实验室环境控制不当、人员操作不规范、仪器耗材混用等因素，都可能导致核酸气溶胶污染或上样污染，进而影响检测结果。一旦出现假阳性，企业需花费大量时间排查验证，严重时会导致批次报废、影响其他产品正常生产。常规 NAT 检测法虽比传统培养法快速，但仍存在明显短板：需配备前处理设备、PCR 仪器等多重耗材，核酸提取、PCR 上机、高浓度产物处理等多个环节均有污染风险；实验准备需 40-60 分钟，操作耗时超 4 小时，每天只能完成 1-2 轮单一类型样本检测，且对场地和人员技能要求极高，需单独划分试剂准备区、样品制备区等多个区域，人力与场地成本高昂。
实验室需分区操作支原体检测，避免阴阳性样本交叉污染，配备单独耗材。江苏干细胞产品支原体检测方法学验证
支原体 NAT 检测的特异性验证面临主要挑战：需设计覆盖多种支原体的 PCR 引物，而覆盖范围越广，越可能因支原体与革兰氏阳性菌的系统进化相关性，出现交叉检测现象，影响结果准确性。因此，特异性验证需重点排查非目标微生物的干扰，确保检测结果的专一性。稳健性验证同样关键，需证实检测方法在人为引入的微小参数变化（如反应温度、试剂浓度波动等）下，仍能保持结果稳定，避免因实验条件差异导致的检测偏差。这两项验证直接决定了 NAT 方法在不同实验室、不同操作场景下的适用性，是其获得法规认可的重要前提。
上海生物制品支原体检测指示细胞培养法湖州申科支原体检测试剂盒通过FDA DMF备案，支持全球药品申报使用。
湖州申科外源因子全自动核酸检测分析系统打造了 “样本进、结果出” 的高效检测流程，彻底简化支原体检测操作。检测只需一步式加样，最大支持 1mL 样本直接上样，无需复杂前处理，加样后系统自动完成核酸提取与检测，全程 3 小时内即可获取结果，其中样本准备时间不足 5 分钟，检测流程只需 2.5 小时。相比传统方法水浴消化、磁珠分离、洗脱等繁琐步骤，该系统操作极大简化，且配备 UI 触屏控制系统，内置标准化程序，支持扫码启动检测，无需专业 qPCR 操作培训，普通人员经简单指导即可上手。系统采用 4 通道单独运行设计，可同步开展不同样本检测，仪器还支持叠加延展通道，进一步提升检测产能，适配生物药多批次检测需求。
为解决传统方法的局限，各国药典纷纷认可支原体核酸检测（NAT）法作为替代方案。EP 2.6.7、USP <77>、JP <G3-14-170>均明确了 NAT 法的应用标准，《中国药典》3301 也规定 “可采用经国家药品检定机构认可的其他方法”，并明确 NAT 法替代培养法时检测限需达 10 CFU/mL，替代指示细胞培养法时需达 100 CFU/mL。NAT 法凭借检测速度快、特异性强的优势，成为新型生物制品支原体检测的理想选择，且法规明确只要通过相关验证，即可正式替代传统方法，为企业提供了合规且高效的检测路径。
CAR-T 产品支原体检测需在放行前快速完成，湖州申科快速版试剂盒 2.5 小时可出结果。
AdvSHENTEK外源因子全自动核酸检测分析系统以 “迷你 qPCR 实验室” 的创新形态，突破了传统支原体检测的场地限制。整套系统尺寸为 380mm×305mm×343mm，重量只有 14kg，体积小巧、易于部署，无需专门的 PCR 实验室，只需一间普通实验室即可满足检测需求，大幅降低了企业的场地投入成本。这与传统 NAT 法需严格划分试剂准备区、样本制备区、扩增区等多个功能区域的要求形成鲜明对比，尤其适合场地资源紧张的中小企业。同时，系统一体化设计减少了耗材搭配与损耗，自动化流程降低了人为操作失误导致的重复检测成本，从场地、人力、耗材多维度为企业实现降本增效，让支原体检测更具经济性。
培养基、血清等原辅料入库前需做支原体检测，排除外源污染风险。河南免疫细胞产品支原体检测指示细胞培养法
支原体检测是生物制品质量控制的关键环节，需兼顾合规性与检测效率。江苏干细胞产品支原体检测方法学验证
检测限验证是支原体 NAT 方法（核酸扩增法）合规性的关键要求，法规明确界定需为每种目标支原体确定阳性检测临界值。验证流程需满足严格的实验设计：每种支原体至少进行三次单独的 10 倍梯度稀释，每次稀释后需制备平行管检测，再确保各稀释浓度获得 24 个检测结果。阳性临界值的判定标准为，该浓度下至少 95% 的试验运行能得到阳性结果，即 24 个样品中需至少出现 23 个有效阳性结果。这一严谨设计旨在确保 NAT 检测方法在实际应用中，能够稳定检出低浓度支原体污染，避免因检测灵敏度不足导致的安全风险，为生物制品质量控制提供可靠保障。
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