浙江重组蛋白内毒素检测抗干扰方案

在內毒素检测的技术体系中，凝胶法与动态显色法基于不同原理与特性，形成互补应用格局。凝胶法依托鲎试剂与内毒素的凝集反应，实现定性或半定量检测，其灵敏度覆盖 0.03EU/ml、0.06EU/ml 等多梯度，60 分钟即可完成反应；检测结果依赖肉眼观察（180° 倒转判读凝胶形成），数据需手工记录，配套 内毒素凝胶法测定仪（恒温仪） 即可开展，虽自动化程度有限，但操作简洁，适用于生产环节的快速初筛。与之相比，动态显色法通过监测反应混合物吸光度或透光率的变化（如达预设检测值的反应时间、信号增速）实现 定量检测 ，灵敏度拓展至 5-0.005EU/ml ，60-90 分钟反应时长虽略长，却可借助酶标仪或全自动内毒素检测分析仪完成全流程自动化操作—软件实时采集数据，契合药品生产质量管理规范（GMP）对数据追溯与精度的要求。二者各有侧重：凝胶法以 “快速定性” 服务基础防控，动态显色法凭 “准确定量 + 自动化” 支撑严苛质控，共同为內毒素检测提供灵活适配的技术路径。

检测细菌内毒素的堂试剂方法，是一个生物反应过程，受到很多因素的干扰。在一个供试品的检测方法固定下来之前，为了得到准确的结果，必须要了解供试品与鲎试剂之间的相互关系。供试品中的成分往往非常复杂，而且会干扰试验检测系统的功能。很多干扰的机理，并不是非常清楚。但是业界比较能够接受的理论是，如果供试品中某些因子影响了鲎试剂中蛋白的表达功能，则被认为是干扰作用（Inhibition/Enhancement，V/E）。干扰作用产生的因素较多，一般包括试剂因素（鲎试剂、内毒素标准品）供试品因素（pH值、温度、离子强度、浓度、水溶性、黏度、可发生鲎试剂反应的非内毒素杂质）和实验因素（试验器皿、细菌内毒素检查用水、鲎试剂抗干扰能力）等。

内毒素检测重组级联试剂（rCR）在方法桥接方面具有明显优势，可大幅度降低实验室的转换成本。在设备兼容性上，rCR 无需额外采购新设备，完全适配天然鲎动态显色法现用的酶标仪（如 Molecular Devices、Tecan sunrise、Thermo MultiSkan ET 等品牌），支持 405nm 波长动态读数和 37℃恒温孵育。操作流程上，rCR 的样品处理、试剂混合、加样孵育等步骤与天然鲎试剂一致，实验室无需重新培训操作人员或修改 SOP。显色系统方面，rCR 沿用与天然试剂相同的 PNA 显色底物，通过黄色信号变化定量，检测原理和数据分析方法保持不变。这种高度兼容性使实验室能快速完成方法验证和切换，加速重组试剂的合规应用进程。

湖州申科建立了标准化的低内毒素回收（LER）技术服务流程，全周期支撑内毒素检测优化：7 个自然日内完成客户沟通与 LER 确认，用天然鲎、重组鲎等方法检测并出具报告；60 个自然日开展方法开发，分析 LER 成因（如螯合剂、蛋白质 IP）并研究去掩蔽方案；30 个自然日进行 HTS 验证，完成 3 批 LER 实验与干扰实验，交付稳定试剂盒、操作规程及培训；再协助方法转移与 cGMP 验证。流程每环节均围绕内毒素检测展开，确保企业高效解决 LER 问题，满足法规要求。

细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁外膜释放的脂多糖（LPS）成分，具有极强的生物活性，微量即可引发人体发热、休克甚至多脏器功能衰竭。因此，在生物制品、医疗器械、制药用水等领域，细菌内毒素检测是保障产品安全性的关键质控环节。其检测原理基于内毒素与特定试剂的特异性反应：内毒素可活化鲎血变形细胞裂解物（LAL）中的凝血级联反应，通过C因子通路触发酶促反应，通过观察凝胶形成、浊度变化或显色强度实现定量或定性分析。目前，各国药典均将内毒素检测列为强制要求，以降低临床应用中的热原风险。

《中国药典》对内毒素检测提出了非常严格的要求，以确保药品的质量和安全性。湖州申科生物提供一系列高质量的细菌内毒素检测产品，旨在为实验室和工厂生产提供准确、快速的检测方案，产品涵盖了凝胶法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、重组C因子法（rFC）和重组级联试剂（rCR）、无热原吸头、内毒素检查用水、自动化设备、内毒素工作标准品、内毒素指示剂等多种产品，满足不同场景下的需求，同时可为复杂样品基质的内毒素检测提供解决方案。