一次合格的 MAT 法热原检测，需同时满足 “合格标曲” 与 “合格样品检测值及回收率” 两大关键条件。合格标曲需具备四要素：一是良好线性，采用 4-Parameter Logistic 拟合，R² 需接近 1.0，避免线性不佳导致定量偏差；二是良好信号值，各浓度点 OD 值需呈梯度变化，高浓度点 OD 值需足够（如上限浓度 OD600 达 1.0 左右），信号过低会影响灵敏度；三是良好 CV，复孔间 CV 需控制在合理范围（定量限内≤25%、定量上下限≤30%），确保重复性；四是良好背景值，阴性对照 OD 值需低于标曲下限浓度点 10%，排除外源污染。合格样品检测值则需满足加标回收率在 50%-200%，例如文档中某样品 10 倍稀释回收率 41.3%（不合格），20 倍 71.3%（接近合格），40 倍 97.7%（合格），需在 MVD 范围内调整稀释倍数，同时样品热原浓度需低于规定限值（CLC），方可判定样品符合要求。
热原检测采用人外周血单核细胞（PBMC），优势是天然受体谱系完整，但供体差异导致变异系数（CV）高达25%。辽宁热原检测合规申报
PBMC（外周血单个核细胞）的供体差异会直接导致热原检测结果的波动，主要体现在 IL-6 释放水平的不一致。不同供体的 PBMC，其单核细胞比例、TLR 受体表达量、免疫活性状态存在差异：有的供体 PBMC 受热原刺激后， IL-6 释放量高；有的则极低，甚至无明显响应。实验数据显示， PBMC 的标曲各浓度点相对偏差有高达 171.43%的，正是这种差异的体现，导致热原检测结果难以标准化，无法准确判断供试品热原是否超标，从而增加了药品的质量控制风险。
江苏非动物源热原检测技术服务鲎试验法（LAL）法进行热原检测灵敏度高、操作方便，但只针对内毒素，易受干扰且有 LER 现象。
革兰氏阳性菌注射剂产品只依赖内毒素检测存在安全风险，需结合热原检测特性制定防控方案。内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁的脂多糖成分，而革兰氏阳性菌可产生非内毒素热原（NEPs），如脂磷壁酸，这类物质同样能引发人体发热反应，若只检测内毒素，可能遗漏 NEPs 污染，导致临床用药风险。对此，风险评估需重点关注三点：一是建议开展家兔法与内毒素检测的一致性实验，对比两种方法的检测结果，排查是否存在内毒素未检出但家兔法阳性的情况；二是采用 MAT 法热原检测，其通过单核细胞活化机制，可同时识别内毒素与 NEPs，若 MAT 法检测阳性，需进一步追溯 NEPs 来源；三是若无法排除 NEPs 风险，必须按药典要求补充热原检测（如 MAT 法或家兔法），而非只依赖内毒素检测。尤其对于新药或工艺变更后的产品，需通过多方法验证，确保热原检测覆盖所有潜在致热物质，保障临床用药安全。
PyroSHENTEK®热原检测试剂盒（货号 1502100，规格 96 测试 / 盒）优势在于搭载 MAT 特定单核细胞系，细胞表面表达多种 Toll 样受体（TLR），可响应不同类型热原。该细胞系来源清晰、可溯源，均一性强且无供体依赖，有效规避了传统 PBMC 因供体差异导致的结果波动，同时安全风险低，无需担忧外源因子污染。试剂盒采用 “标准化单核细胞 + ELISA 检测” 一体化体系，通过严格的细胞质量控制（如冻存复融后活率达标），确保每次检测的细胞状态一致；搭配预包被 IL-6 抗体的酶标板与配套试剂，进一步减少体系误差。从标曲数据来看，其拟合采用 4-Parameter Logistic 模型，R² 达 1.000，EC50 为 0.119EU/mL，参数置信区间稳定，复孔结果重复性优异，能为热原定量提供准确如一的数据支撑，避免因体系不稳定导致的检测偏差。
中国药典9301已将MAT列为热原检测的补充方法，美国药典鼓励企业采用经过验证的MAT替代家兔法。
MAT法热原检测中，非内毒素热原（NEP）对照品设为 “选做”，且试剂盒不默认配备，需结合检测需求灵活使用，背后有明确的设置逻辑。首先，试剂盒开发阶段已通过验证（用多种 NEP 配体刺激细胞），证明其可检出 NEP，后期实验是否加入 NEP 对照，只需根据内部管理要求或专业人员建议确定，无需强制设置；若产品产线明确无 NEP 污染风险（如只使用革兰氏阴性菌原料），可删除 NEP 对照，简化操作。其次，试剂盒不配备 NEP 对照品，是因不同用户需求差异大 —— 部分用户需检测特定 NEP（如脂磷壁酸），部分需检测广谱 NEP，因此提供单独购买选项，用户可按需选择，避免资源浪费。NEP 对照品的主要使用场景包括：一是方法验证阶段，用于确认试剂盒对 NEP 的响应性；二是产品工艺变更后，排查是否引入 NEP 污染；三是欧盟申报时，需证明方法可覆盖 NEP，此时需加入 NEP 对照品并显示阳性结果。若样品检测中 NEP 对照品阳性，而样品检测阴性，可排除 NEP 污染；若样品阳性，则需进一步鉴定热原类型。
通过加标回收实验，热原检测MAT法验证了对LTA、酵母多糖等非内毒素热原的检出能力。广东血液制品热原检测
MAT 热原检测能帮助分析和解决生物制品生产中出现的低内毒素回收（LER）现象。辽宁热原检测合规申报
单核细胞活化反应测定（MAT）是近年来热原检测领域的突破性技术，其原理基于人体免疫系统对热原的天然应答机制：人源单核细胞（如 THP-1 细胞系或新鲜人全血单核细胞）在热原刺激下，会活化胞内炎症信号通路，释放 IL-6、TNF-α 等促炎细胞因子，通过 ELISA 检测细胞因子的浓度，即可间接反映样品中热原的总量与活性。与传统检测方法相比，MAT 法具备三大不可替代的优势：一是广谱性，可同时检测细菌内毒素、病毒、真菌毒素、支原体等所有类型热原，填补了鲎试验法只能检测内毒素的 “非内毒素热原盲区”，尤其适用于疫苗、基因治疗产品等易受多种热原污染的高风险产品；二是人源相关性，采用与人体同源的细胞模型，检测结果更贴近临床实际热原反应，避免家兔试验中动物种属差异导致的误判；三是高灵敏度，对细菌内毒素的检测限可达 0.0125EU/mL，对非内毒素热原（如酵母多糖、腺病毒）的检测限低至 ng/pg 级，满足低限值产品的质控需求。
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