热原检测技术自 20 世纪初问世以来，经历了 “动物试验→体外生化检测→细胞生物学检测” 的三次关键变革，每一次变革均推动检测效率、准确性与全面性的提升。20 世纪初至中期，热原检测方法只有家兔热原试验，通过观察家兔体温变化筛查热原，虽实现了广谱检测，但存在动物成本高、操作繁琐、灵敏度低、种属差异大等局限，难以满足制药行业快速发展需求。20 世纪 60 年代，鲎试验法（LAL 法）的发明开启了热原检测的 “体外生化时代”，利用鲎血变形细胞裂解物的凝血级联反应检测细菌内毒素，灵敏度提升至 ng 级，检测时间缩短至 1-2 小时，迅速成为制药行业常规质控方法；但该方法依赖鲎资源，易受 β- 葡聚糖干扰，且只能检测内毒素，无法覆盖非内毒素热原。21 世纪以来，重组技术与细胞生物学技术的发展推动热原检测进入 “全热原管控时代”：重组级联试剂（rCR）与重组 C 因子试剂（rFC）通过基因工程技术制备，摆脱对鲎资源的依赖，消除葡聚糖干扰，实现标准化生产；单核细胞活化反应测定（MAT）利用人源单核细胞检测全类型热原，填补非内毒素热原检测空白，且结果更贴近人体实际反应。
MAT 法干扰试验需设 3 个样品浓度梯度（A、2A、4A 倍），均不超过MVD且加标回收合格。四川热原检测
PBMC（外周血单个核细胞）用于 MAT 热原检测时，存在异质性与血源供应两大关键问题。从异质性来看，PBMC 含 12% 单核细胞与 88% 淋巴细胞，且来自不同供体，细胞组成、功能状态及热原反应存在明显差异，导致热原刺激后 IL-6 释放量波动大，标准化难度高。血源供应方面，除受献血者数量、时间及采集血液政策限制外，EP2.6.30 还要求严格检测乙肝、丙肝等标志物，且采集血液、处理、试剂制备全程需无菌操作，流程环节多、复杂度高，远不及单核细胞系制备简便，易影响热原检测的时效性与稳定性。江苏热原检测操作步骤单核细胞活化试验MAT通过量化人源单核细胞的免疫应答，实现对LPS、脂磷壁酸、β-葡聚糖的同步检测。
MAT 法热原检测标曲采用非倍比稀释，而非 1-0.5-0.25 的倍比稀释，主要优势在于提升标曲准确性与适用性，避免稀释误差影响。一是可密集覆盖关键浓度区间：热原检测的重点关注区为低浓度拐点（如 0.0125-0.1EU/mL）与高浓度平台区（如 0.5-1EU/mL），非倍比稀释可在这些区间设置更多浓度点（如 0.0125、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5、1EU/mL），提升曲线拟合精度，而倍比稀释低浓度点少，易导致低浓度热原定量不准。二是降低稀释误差累积：倍比稀释需连续稀释（如 1EU/mL→0.5EU/mL→0.25EU/mL），每一步误差会累积，导致低浓度点实际浓度偏离理论值；非倍比稀释通过单独配制每个浓度点（如直接用标准品配制 0.025EU/mL），避免误差累积，提升标曲可靠性。三是适配不同样品浓度：非倍比稀释可根据样品预期浓度调整标曲范围，如样品预期浓度 0.05EU/mL，可增加 0.025、0.05、0.1EU/mL 点，确保样品浓度落在标曲线性区，而倍比稀释范围固定，灵活性差。这些优势使非倍比稀释成为 MAT 法标曲配制的优先选择方式。
PyroSHENTEK®热原检测试剂盒突破传统检测方法局限，不仅能检测革兰氏阴性菌来源的内毒素，还可准确识别革兰氏阳性菌（脂磷壁酸 LTA）、病毒、真菌等产生的非内毒素热原（NEP），契合热原检测 “全风险覆盖” 的法规需求。其定量限低至 0.025EU/mL，实验数据显示，对 Flagellin、LTA、Resiquimod、Poly-IC 等多种 NEP 均能有效检出，且加标回收率稳定在 50%-200% 合格范围（如贝伐珠单抗注射液中 LTA 加标回收率 66.8%、Zysoman 加标回收率 113%）。此外，试剂盒联合了国内相关机构完成室间验证，与传统家兔热原试验（RPT）桥接结果高度一致 —— 如人用狂犬病疫苗（Vero 细胞）中 LPS 加标回收率 152.1%、人血白蛋白中 LPS 加标回收率 71.6%，检测数据科学性符合国际法规要求，助力企业无缝衔接中美欧等地申报标准。
PyroSHENTEK热原检测试剂盒采用“单核细胞+ELISA”标准化体系，检测结果稳定、重复性好，数据准确。
家兔热原试验作为热原检测领域的 “法定传统方法”，被中国药典（ChP）、美国药典（USP）、欧洲药典（EP）均列为法定检测项目，其主要优势在于可通过家兔体温应答筛查所有类型热原，尤其适用于无法排除非内毒素热原污染的高风险产品，如血液制品、放射性质药物及部分生物制剂。然而，家兔热原试验存在明显局限：动物个体差异大，需额外投入时间与成本筛选合格家兔；检测周期长（至少 6 小时），无法满足生物制品快速放行需求；灵敏度较低（对 LPS 检测限≥5EU/kg），与全球倡导的“动物福利3R原则”背道而驰。
湖州申科 MAT法热原检测试剂盒细胞复融后可直接使用，无需离心复苏，24 小时内出检测结果。
江苏热原检测操作步骤热原检测实验中，标准化培养基与恒定环境让单核细胞系活性稳定，避免PBMC冻存后的功能衰减。四川热原检测
一次合格的 MAT 法热原检测，需同时满足 “合格标曲” 与 “合格样品检测值及回收率” 两大关键条件。合格标曲需具备四要素：一是良好线性，采用 4-Parameter Logistic 拟合，R² 需接近 1.0，避免线性不佳导致定量偏差；二是良好信号值，各浓度点 OD 值需呈梯度变化，高浓度点 OD 值需足够（如上限浓度 OD600 达 1.0 左右），信号过低会影响灵敏度；三是良好 CV，复孔间 CV 需控制在合理范围（定量限内≤25%、定量上下限≤30%），确保重复性；四是良好背景值，阴性对照 OD 值需低于标曲下限浓度点 10%，排除外源污染。合格样品检测值则需满足加标回收率在 50%-200%，例如文档中某样品 10 倍稀释回收率 41.3%（不合格），20 倍 71.3%（接近合格），40 倍 97.7%（合格），需在 MVD 范围内调整稀释倍数，同时样品热原浓度需低于规定限值（CLC），方可判定样品符合要求。
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