连续生物制造（Continuous Bioprocessing）要求填料支持高流速、低背压和数千次循环稳定性。填料如POROS系列和Eshmuno HCX采用灌注色谱（Perfusion Chromatography）技术，6000-8000Å超大贯穿孔允许大分子快速传质，实现10倍于传统填料的流速。这类填料机械强度极高，可承受>3000次循环，配基脱落<1 ppm。优势在于设备利用率高，生产周期从数天缩短至数小时，占地空间减少80%。但开发需配合过程分析技术（PAT）和复杂控制系统。在单抗、胰岛素等稳定蛋白生产中已有商业化案例，FDA已批准连续生产工艺，了未来生物制药从批次向连续生产的范式转变。电荷诱导的混合模式填料在特定电导下增强结合选择性。肝素纯化介质推荐
疏水作用层析（HIC）填料利用蛋白表面疏水区域与固定相烷基或芳基配基的可逆结合，在高盐条件下上样，低盐条件下洗脱。这类填料以丁基、辛基或苯基为配基，偶联在琼脂糖或聚合物基质上，Toyopearl Butyl和Phenyl Sepharose应用广。HIC的优势在于生理pH操作，有效维持蛋白活性，对抗体聚集体去除效果明显，常与离子交换串联使用形成正交纯化。其载量适中（20-40 mg/mL），分辨率优于亲和层析但低于离子交换。挑战在于条件优化复杂，盐浓度和pH需精确控制。广泛应用于抗体药物中聚集体/片段去除、ADC药物DAR值调控及膜蛋白纯化，是精纯步骤的关键技术。硅胶蛋白层析填料厂家批发高通量筛选平台借助96孔板式填料快速优化纯化条件。
配基在填料表面的密度（偶联量）是影响载量和选择性的重要因素。密度过低则载量不足；密度过高可能导致空间位阻，反而降低有效载量，或因多价结合而过强吸附，洗脱困难。配基与基质的偶联化学必须稳定，能耐受纯化、在位清洗和长期储存的条件。常用的活化方法包括溴化氰法、环氧法、NHS酯法等，它们与配基上的氨基、巯基或羟基反应形成共价键。先进的偶联技术能够实现配基的定向固定，以优化其空间取向和生物活性。现代蛋白纯化实践中，用户可以选择购买商品化的预装柱，或购买散装填料自行装填。预装柱由厂商使用精密设备装填，柱效高、重现性好、开箱即用，节省时间，特别适合方法开发、小规模制备和需要高重复性的QC分析。自装柱则更具灵活性，用户可根据需要选择不同规格的空柱和填料，成本效益更高，适合工艺摸索和特定规模的生产。选择何种形式取决于应用需求、预算以及对工艺控制的要求。
凝胶过滤填料，又称体积排阻色谱填料，是基于蛋白分子大小差异实现分离的常用介质。其原理是填料内部具有孔径均一的多孔结构，当蛋白混合液流经色谱柱时，大分子蛋白无法进入填料孔隙，只能沿颗粒间隙快速流出；小分子蛋白则可进入孔隙内部，流经路径更长，洗脱时间更久，从而按分子体积从大到小的顺序实现分离。这类填料多采用葡聚糖、琼脂糖、聚丙烯酰胺等亲水性高分子材料制备，具有生物相容性好、不与蛋白发生强相互作用的特点，适用于蛋白样品的初步分离、脱盐及分子量测定，尤其适合对活性敏感的蛋白纯化，可很大程度保留蛋白天然构象和生物活性。亲和填料利用特异性相互作用，如抗原-抗体结合，捕获目标蛋白。
以纤维素为基质的离子交换填料凭借天然亲水性、低非特异性吸附和低成本优势，在血液制品和疫苗领域长期占有一席之地。DEAE Sephacel和CM Cellulose通过醚键将配基偶联到纤维状纤维素上，形成大孔结构，尤其适合大分子量蛋白和病毒颗粒的纯化。其优势包括：极高的生物安全性，无合成聚合物毒性担忧；易于大规模生产，价格为合成填料的1/5-1/10；对脆弱蛋白特别温和。缺点是机械强度低，只能重力流或低流速操作，分辨率有限。适用于免疫球蛋白粗提、白蛋白纯化及病毒样颗粒捕获，在发展中国家生物制品生产中仍是主流选择。
活化好的预装柱节省时间，确保纯化过程重现性和便利性。肝素纯化介质推荐
复合模式（Mixed-Mode）填料整合疏水、离子交换、氢键等多种作用力，通过协同效应实现传统单模式填料无法达到的选择性。Capto MMC和Capto Adhere是典型，前者兼具弱阳离子交换和疏水作用，后者整合强阴离子交换、疏水及氢键作用。这类填料可在电导率较高条件下结合蛋白，简化样品前处理，对电荷异构体、聚集体和HCP残留去除效果明显。其优势在于工艺步骤缩减潜力大，可实现"两步法"替代传统"三步法"纯化策略，提升收率并降低成本。挑战在于方法开发复杂，需筛选pH、盐浓度和添加剂。在抗体、重组蛋白精纯中应用日益，是工艺强化（Process Intensification）的关键工具。
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