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所有反应孔背景信号好、Ct值都在19~25之间,荧光扩增曲线呈典型的S型,说明本发明实例1提供的血液样本快速提取法用于荧光PCR扩增的方法具有较好的可行性。将四份不同来源不同的人血液样本进行荧光PCR扩增检测,每份样本平行三次,结果分别如图2、图3、图4、图5所示,由图可见,每个样本的平行实验,其曲线的Ct值很接近且≤25。说明本发明实例提供的血液样本快速提取法用于荧光PCR扩增的方法有可靠的重复性以及较好的均一性。实施例2与市场现有的血液基因组提取试剂盒产品对比。本发明的具体步骤如下:将**管颠倒混匀后,吸取100μL血液至,加入200μL的核酸释放剂(20mM~80mM的氢氧化钠溶液、~、~、~、~***钠、~3%甲酰胺),涡旋混匀,然后5000g离心30s,弃上清,获得细胞沉淀;然后再加入200μL核酸释放剂,涡旋1min至沉淀完全散开,5000g离心30s,弃上清;向细胞沉淀中加入50μL核酸释放剂,涡旋振荡1min,室温放置5min,12000g离心30s,取上清液即为提取的血液基因组DNA;取上清液3μL,加入到配制好的荧光PCR反应液,于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。选用某公司的血液基因组提取试剂盒作为方法比对,具体操作过程:将取血管颠倒混匀数次,吸取200μL血液于。
本发明涉及一种快速提取血液和口腔拭子基因组DNA的方法。背景技术:近年来,随着荧光PCR技术的不断成熟。该技术在科研及检验领域得到了应用,成为分子生物学领域不可或缺的一项重要技术。在进行遗传背景分析过程中,血液、唾液和口腔拭子成为重要的生物分析样本。但是,由于血液、唾液和口腔拭子中存在有很多PCR反应物,例如血液中含有血红素,蛋白质,脂肪,抗凝剂等,唾液和口腔拭子含有蛋白质,脂肪,抗凝剂等,使得用血液、唾液和口腔拭子直接进行荧光PCR反应变得尤为困难。因此,现在临床上往往先要从血液、唾液和口腔拭子样本中纯化出DNA,才能进行样本的DNA扩增。提取血液、唾液和口腔拭子基因组的方法种类非常多,传统酚氯仿抽提法,高盐盐析法,模离心柱吸附法,磁珠法,等等。经典的血液核酸提取方法包括几个过程。1.通过低渗液涨破红细胞,将血红素物质释放出来,然后离心,清洗去除血红素。2.通过裂解液裂解白细胞,释放核酸物质。3.通过离心柱或纳米磁珠特异性吸附核酸物质,去除其他杂质。4.通过漂洗液洗掉挂在离心柱或纳米磁珠表面的化学试剂残留和蛋白残留。5.加入洗脱液将核酸从离心柱或纳米磁珠上洗脱下来。 口腔拭子应该持续15s而不产生长久变形或者折断的现象。

加入20μteinaseK溶液,混匀。加入200μL缓冲液GB,充分颠倒混匀,在56℃放置14min(期间颠倒混合样品数次),溶液应变清亮,若未完全变清亮,延长裂解时间至完全变清亮。加人200μL无水乙醇,充分振荡混匀10s,此时可能会出现絮状沉淀。将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中),12,000rpm离心30s,倒掉废液,将吸附柱CB3放回收集管中。向吸附柱中加入500μLGD(已加入无水乙醇),12,000rpm离心30s,弃废液,将吸附柱CB3放回收集管中。向吸附柱中加入600μLPW(已加入无水乙醇),12,000rpm离心30s,弃废液,将吸附柱CB3放回收集管中。12,000rpm(~13,400×g)离心2min。将吸附柱放置新的,以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。向吸附柱中悬空滴加50~200μL洗脱缓冲液,室温放置2~5分钟,12,000rpm(~13,400×g)离心2min,将溶液收集到离心管中,测定浓度及纯度后,取3μL,加入到配制好的荧光PCR反应液,于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。用本发明和对照产品对8份样本同时进行荧光PCR扩增。结果如图6,本发明所有反应孔背景信号好、Ct值都在21~25之间,荧光扩增曲线呈典型的S型。这款口腔拭子采用国际通用的方便消灭细菌的纸塑包装。湖南口腔拭子口腔拭子厂家
口腔拭子外形应该是端正、整洁的、光滑的、色泽要均匀、没有毛刺、没有霉点、伤痕、刮痕、裂缝等缺限的。重庆海绵口腔拭子
1根微细型鼻咽植绒拭子50支/盒6盒/箱货号产品名称规格902CSRK涂抹棒取样盒(配有1个SRK稀释液10ml的自立管、1个塑料涂抹棒粘胶纤维拭子)25支/盒902C2SRK涂抹棒取样盒(配有1个SRK稀释液10ml的自立管、1个塑料涂抹棒粘胶纤维拭子)250支/箱905CSRK涂抹棒取样盒(配有培养基自立管、涂抹棒粘胶纤维拭子、取样模具10*10cm各1个)10套/盒908CSRK涂抹棒取样盒(配有1个SRK稀释液、1个塑料涂抹棒粘胶纤维拭子)25支/盒167KS01塑料单独包装(1个塑料涂抹棒粘胶纤维拭子)1000支/箱155C管装单独包装(1个塑料涂抹棒粘胶纤维拭子)1000支/箱922CSRK取样运送管(配有10ml稀释液、1个9cm塑料涂抹棒粘胶拭子,独立包装于无菌袋里)1支/包926CSRK取样运送管(配有10ml稀释液、1个9cm塑料涂抹棒粘胶拭子)50支/盒929CSRK取样试剂盒(配有letheen肉汤培养基、适用于petrifilm纸片平板计数)50支/盒947CSRK取样运送管(配有4ml通用中和液、1个9cm塑料涂抹棒粘胶拭子)50支/盒947C2SRK取样运送管(配有4ml通用中和液、1个9cm塑料涂抹棒粘胶拭子)300支/箱938CSRK471取样盒(每小袋配有10ml稀释液、8个管装塑料涂抹棒聚酯纤维拭子)25支/盒954CSRKPHARMA,塑料涂抹棒。重庆海绵口腔拭子
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