非洲猪瘟抗原快检卡诊断试剂检测

八方同创提醒猪场实验室，实验室需要有质控品，质控品的保存事项如下：质控品的保存：1、未开封的质控品储存条件（1）对于干粉质控品，适宜保存在2～8℃的温度中。（2）对于大部分的液态质控品，一般保存在-20～-70℃。（3）经常使用的质粒可以保存在-20℃冰箱中，长期保存建议放在-70℃冰箱。此外，还可以将质粒转入合适的感受态菌株中，通过保存菌种的方法达到保存质粒的目的，菌种2～8℃保存。2、开封后的质控品储存条件（1）对于多数开封后的质控品，-20℃保存即可。（2）对于开封复溶后分装冷冻的质控品，建议保存在-20～-70℃的温度中。另外，需要关注有些项目在不同条件下的稳定性是不同的，需要仔细阅读说明书的保存条件这一栏。（3）另外，储存质控品时要避免自动除霜冰箱，冰箱门要避免阳光直射，严格按照说明书操作。八方同创提醒猪场分析的敏感性是指检测方法性能属性，可以表示为”检测限”。非洲猪瘟抗原快检卡诊断试剂检测

非洲猪瘟病毒（ASFV）颗粒在无血清培养基中于pH4–10范围内保持稳定，但当环境pH低于4或高于11.5时，可在数分钟内迅速失活。值得注意的是，在含血清条件下病毒稳定性增强：5°C保存时，血清中的病毒可维持活性性长达6年；即使在含25%血清的培养基中处于pH13.4的强碱性环境，仍可保持数天活性。病毒灭活可通过热处理实现（60°C持续30分钟，或56°C持续70分钟）。多种有机溶剂可通过破坏病毒脂质包膜使其失活，但该病毒对蛋白酶及核酸酶表现出较强抗性。八方同创建议：开展ELISA检测前应对样品进行规范灭活；病原学检测完成后，亦需对剩余样品实施灭活处理，以有效降低生物安全风险，防止交叉污染。非洲猪瘟抗原快检卡诊断试剂检测八方同创研发生产的非洲猪瘟抗体快筛试剂卡适用于非洲猪瘟弱毒株场，无症状或轻症状猪群的净化。

八方同创提醒猪场实验室，移液器的使用注意事项如下：1、影响移液准确性和精确性的因素；1.1吸头的质量以及与移液器的匹配度吸头的做工和材质，会影响到吸头内壁的液体残留和移液量的准确性；吸头与移液器的匹配度会影响到吸头与移液器之间的气密性，选择适配的吸头与移液器。1.2移液器的日常维护移液器通过空气置换原理进行移液，其密封性、弹簧的弹性形变等是影响移液的关键因素，因此平时使用移液器时，必须要正确操作、定期维护，才能保证移液器的准确。1.3操作者使用移液器的操作者本身要养成正确的操作规范，可提高移液的准确性、减少移液过程产生的误差，保证实验结果。

八方同创提醒猪场，PCR扩增完成后读取和分析结果方法如下：1、反应结束后保存结果，仪器将对结果进行自动分析，给出CT值，注意查看结果的扩增曲线的性状，存在CT值的结果需呈S型曲线。2、根据说明书，查看阴阳对照是否符合质控标准，扩增曲线是否为标准的S型曲线，曲线异常或不满足质量控制的情况下样品检测结果无效。3、质控成立，按照试剂盒判定标准对结果进行阴性、阳性及可疑（可疑样品需复测，两次可疑判阳性）判定。4、对于可疑样本选用50ul的体系复测。5、注意结果是否有内标，内标CT值是否均匀一致，从而验证核酸是否存在抑制物。6、若无内标，则考虑：体系配置错误（未加内标）、仪器设置问题、样品中存在抑制剂、体系未混匀、分装误差等，需对样品进行复测。7、若阳性对照不出值，则考虑：仪器未设置孔位、体系配置错误、人员操作失误、试剂失效等原因。8、若阴性对照出值，则考虑：污染（产物污染、气溶胶污染、试剂污染）；人员操作不当等。立即停止实验排查原因并启动实验室消毒，排除污染后再做样品检测。9、填写检测结果统计表。八方同创提醒猪场临床症状是指 观察者可感知的猪病的客观证据。

上海创宏生物一线团队研究表明，当前流行的非洲猪瘟病毒以基因缺失株和重组毒株为主，其毒力较2019年经典强毒株衰减，但适应性和隐蔽性大幅提升，这种“温和”表象背后，隐藏的防控难度远超以往，风险集中体现在三点：一是监测难度激增，漏检风险突出。变异毒株在猪体内呈现典型的“间歇性排毒”特征，常规单一部位采样检测的窗口期极窄，极易出现“检测阴性”的假安全信号。上海创宏生物实验室数据显示，采用口鼻拭子检测，漏检率可达30%以上，而采用“尾根血拭子+口鼻拭子+肛拭子”的组合采样方式，可将漏检率降至5%以下。二是传播隐蔽性，无症状猪可长期“带毒生产”，作为移动传染源在猪群中扩散，一旦遇到转群、免疫、温差变化等应激刺激，便会引发病毒大量复制和“应激后排毒”，导致在看似正常的猪群中突然暴发。三是窗口期短，处置难度加大。当猪只出现皮肤发红、精神沉郁等肉眼可见异常时，病毒往往已在群体中完成数轮潜伏与扩散，形成群体***局面，此时再实施“拔牙”，成功率不足20%，极易出现反复。上海创宏生物临床案例统计表明，若在早期（无症状阶段）精细发现并处置，控制成功率可提升至85%以上。八方同创推出的非洲猪瘟冻干微球试剂盒适用于非冷链运输条件，如出海贸易。猪伪狂犬病毒PCR诊断试剂生产

八方同创提醒：PCR实验室进行分区，样品处理区，核酸提取区，核酸扩增区，可以减少污染风险。非洲猪瘟抗原快检卡诊断试剂检测

由于国际报告义务，实验室诊断以建议和法律标准为指导。详细的方法和程序可在WOAH《陆生动物诊断试验和疫苗手册》以及欧盟非洲猪瘟参考实验室（EuropeanUnionReferenceLaboratoryforASF,EURLASF）获得。鉴于非洲猪瘟在欧盟的长期和重大历史影响，现有的指南和法律框架可作为欧洲以外国家参考实验室的典范。

总的来说，可靠的直接（检测病毒）和间接（检测抗体）诊断非洲猪瘟的工具可用于家猪和野猪的适当样本。测试来自家猪或野猪的高质量样本时，检测性能没有差异(Pikalo,Deutschmann,etal.2021)。当前的非洲猪瘟大流行促进了诊断技术的改进，并为国际市场带来了新的商业化酶联免疫吸附试验（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,ELISA）、定量PCR（qPCR）试剂盒和栏边快检（Point-of-CareTests,POCT）（例如八方同创研发的便携式PCR仪BIO MINI PCR 2.0版）。大多数检测可能具有足够的性能，但已发表的比较并不总是可用；在这种情况下，应寻求非洲猪瘟参考实验室的建议。 非洲猪瘟抗原快检卡诊断试剂检测

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