原代细胞培养问题：1、细胞培养过程中，多久更换一次培养基这取决于细胞生长的速度。一般而言2-3天更换一次培养基，许多细胞培养实验室通常在周一，周三，周五更换培养基。注意：冻存细胞复苏后，在6-16小时内更换培养基，以去除残留的二甲基亚枫和死亡的细胞。2、我能扩增培养和再次冻存原代正常人类细胞吗？这取决于细胞的类型。一些细胞类型像神经细胞，...

  原代细胞的分离与培养：从组织制备原代细胞，即使捱过了极其严苛的解离步骤，不严谨的分离操作可能会导致细胞生长缓慢、表型不一致甚至细胞污染，特别是由于组织中可能含有细菌等微生物，污染问题对于原代细胞的分离和培养是一个很大的隐患。而为了让研究人员不再为这些问题头疼，现在已经出现了一些细胞公司可供应现成的原代细胞，并对应配有充分优化的培养基和实验...

  PAS技术是很少可检测不同种类的黏液物质(如糖原、黏蛋白和糖蛋白)的方法，但PAS技术却不能区别黏蛋白和糖原。若要冸确鉴别黏液物质(如黏蛋白或糖原)，需加入糖原消化步骤。大多数情冴下可用α–淀粉酶或麦芽淀粉酶来催化糖原的糖苷键水解，形成水溶性的双糖-麦芽糖，在应用PAS技术之前将糖原从组织切片上除去。人类的唾液被认为是消化糖原的一种有效手...

  原代细胞培养实验室常规步骤为：1）将动物组织从机体中取出并消毒除去存留在组织上的细菌、细菌、等污染源，这些污染源将会所需培养的原代细胞凋亡、停止生长和繁殖直至死亡，因此整个原代细胞培养过程中较全在无菌状态下进行。2）将组织块在选定的蛋白酶溶液中浸泡20-30分钟，通常在37C水浴里进行，而蛋白酶的选定取决于部位组织和所需细胞的类型，比如成...

  糖原及粘液染色法：操作方法：（1）石蜡切片脱蜡至水。（2）0.5%过碘酸水溶液5分钟。或1%过碘酸95%酒精溶液（过碘酸再结晶应重新配制使用）。（3）蒸馏水洗，70%酒精洗。（4）Schiff氏液15-30分钟。（Schiff氏液从冰箱取出升至室温使用）（5）流水冲洗10分钟。（6）苏木素浸染细胞核2-3分钟。（7）脱水、透明、封盖。结果...

  细胞转染之PEI转染法：1.细胞分盘：通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以1×105至4×105细胞/cm2的密度平铺细胞于35mm培养皿上（根据实验需要选择培养皿，使细胞贴壁后所占面积达到培养皿总面积的70－90％）。将细胞置于含5％CO2的37℃温箱中孵育8-24h，当细胞贴壁完全后即可开始转染。转染前2h换液（用1.5ml无血...

  选择原代细胞的原因：长期以来，科学家多依赖永生化的细胞系来进行各种研究，但在过去十年，随着细胞生物学的发展，细胞培养领域发生了巨大变化，新型的技术和培养试剂让使用原代细胞作为研究对象成为可能。相比于细胞系，原代细胞更多保留了体内原始组织的生物学特征，如生长和衰老，因此通过原代细胞可建立更好的细胞疾病模型。原代细胞（Primarycells...

  一种复合细胞外基质成分生物材料制造技术：脱细胞基质生物材料(AcellularTissueMatrix，ACTM)是近二十年来软组织修复材料研究的重要进展。即运用物理或化学方法脱去组织中的所有细胞、抗原、脂质、可溶性蛋白质等物质、保留下的具有完整外观形态、组织学特性及超微结构的不溶性细胞外基质(ExtracellularMatrix，EC...

  原代细胞的获取：1.培养时间无论是酶消化法还是组织块法，取样后培养时间较少需要一周以上的时间，期间可换液或者传代。2.换液时间无论酶消化法还是组织块法，在培养期间需要随时关注细胞的生长状况，需观察其是否贴壁，是否污染，组织块法要观察是否有细胞迁移出来。正常情况下48~72h可换液一次。3.细胞状态判断正常贴壁细胞在培养几天后，会逐渐贴满整...

  糖原及粘液染色法注意事项：1、糖原的固定要及时，而且标本要新鲜。2、如用无水酒精作糖原的固定剂，有它的弊病，因无水酒精渗透较慢，而且容易产生极化，（极化是糖原颗粒趋向于细胞的一端）。故用Gendre氏固定液效果较佳，其配法如下：苦味酸饱和于95%酒精85ml40%甲醛10ml冰醋酸5ml3、各种试剂必须化学纯，亚硫酸钠须有浓厚气味，器皿必...

  糖原及粘液染色法注意事项：1、糖原的固定要及时，而且标本要新鲜。2、如用无水酒精作糖原的固定剂，有它的弊病，因无水酒精渗透较慢，而且容易产生极化，（极化是糖原颗粒趋向于细胞的一端）。故用Gendre氏固定液效果较佳，其配法如下：苦味酸饱和于95%酒精85ml40%甲醛10ml冰醋酸5ml3、各种试剂必须化学纯，亚硫酸钠须有浓厚气味，器皿必...

  通用多糖多酚植物RNA提取试剂盒：1、多糖多酚植物RNA提取试剂盒整合了在提取过程中去除干扰物的技术，已成功用于葡萄，中草药等多糖含量高的样品，成功用于棉花等多酚含量高的样品。另外华越洋还开发了糖类清理剂，PCR压制物清理剂，核酸提取优化剂，样品核酸稳定剂，RNA组织样品保存液等核酸提取辅助产品。2、适用材料普遍：尤其适合解决多醣多酚，色...