鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事项:三维胶原的制备 鼠尾胶原蛋白 型在浓度1mg/ml 以上, pH 左右时可形成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度 1-2mg/ml。胶原蛋白溶解于 0.006mol/L 乙酸 中,在成胶过程中需要加入 0.06体积的 0.1mol/L NaOH 来中和。 需要的溶液 (均需要无菌、 预冷) 10mg/L 酚红用于pH 指示) 0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一 般不用),双蒸水 200ul鼠尾胶原蛋白 型(5mg/ml)加到置于冰浴的离心管中,加入 690ul H2O 12ul0.1mol/L NaOH 12ul0.1mol/LNaOH 加到胶原溶液中, 会由于 NaOH 不能迅速混匀而产生局部的 胶原凝结) 立即混匀。再加入 100ul 10PBS 10培养液,混匀后立即加到培养器皿中(混匀后 pH 左右,如果PBS 或培养液中没有加 酚红,初次使用时需要用 pH 试纸测试)。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便,成本低廉。胶原蛋白是结缔组织和内脏部位外基质的主要成分。北京正规鼠尾胶原单价
胶原蛋白的提取方法:1.碱法提取:碱法提取胶原蛋白常用的处理剂为石灰、氢氧化钠、碳酸钠等。如Holzer等[5]采用1 %~1.5 %石灰水浸泡的方法提取胶原蛋白。由于它容易造成肽键水解,因此得到的水解产物分子量比较低。所以,若想保留胶原的三股螺旋结构,此法不可取。2.盐法提取:盐法提取胶原蛋白所用的中性盐有盐酸-三羟甲基胺基甲烷(Tris-HCl)、氯化钠、柠檬酸盐等。在中性条件下,当盐的浓度达到一定量时,胶原溶解。并且可采用不同浓度的氯化钠对提取的胶原蛋白进行盐析处理,可以沉淀出不同类型的胶原蛋白。合肥昆明鼠尾胶原制备鼠尾胶原:将尾腱剪断置于平皿中,生理盐水浸泡。
胶原蛋白的适用征状:1、由于工作劳累,睡眠不足形成的皮肤晦暗无光、发黄、皮肤弹性差等皮肤衰老的不良症状。2、由于年龄、太阳辐射因素引起的皮肤松弛、下垂、皱纹、干燥等皮肤衰老现象。3、由于体内异常黑色素分泌旺盛,大量沉积皮肤表面,肌肤不能及时代谢出异常黑色素,形成各种色斑。4、由于长期户外活动及皮肤保养不当使肤质受到损伤,过早出现细纹,皮肤干燥、脱皮、、毛孔粗大等不良症状。5、由于内分泌功能紊乱,皮肤肤质差、皮肤发油、发暗,易长青春痘留下的色印、色素沉着等。6、由于生活无规律,吸烟等因素,造成的黑眼圈,眼袋等问题。7.长期电脑旁工作,电脑辐射造成脱发,内分泌紊乱问题。
鼠尾胶原:含细胞三维胶原凝胶的制备(以配制1mg/mL三维胶1mL为例)准备好悬浮于培养液的细胞,并放置于冰浴中。将200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反过来把12μL0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入23μL10×PBS或10×培养液,混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要测定pH值)。加入760μL的细胞悬浮液,混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温放置20min待胶凝固后,加入适当体积的细胞培养液,转移到培养箱中培养。本品在室温下pH中性时可迅速成胶,在操作过程中要尽量保持低温。保存条件4℃保存,切勿冻存,有效期一年。鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验长时程的记录。
鼠尾胶原在心肌细胞氧化损伤中的保护作用:胶原蛋白具有抗氧化作用,但既往在实验室主要将鼠尾胶原用于促进细胞贴壁和支架构建,对于其抗氧化作用目前尚无相关研究。目的:探讨鼠尾胶原对过氧化氢导致离体心肌细胞氧化损伤的保护作用。方法:将原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机接种到铺有鼠尾胶原的培养皿(实验组)和普通培养皿(对照组)中,并且均用0,10,100μmol/L H2O2诱导。24 h后,以电子显微镜观察各组乳鼠心肌细胞的形态,应用MTT 比色法检测心肌细胞存活率,TUNEL 法检测心肌细胞凋亡形态,流式细胞技术检测心肌细胞凋亡率,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法检测丙二醛水平,Western-Blot 检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达。自制的鼠尾胶原能正常地培养出大鼠耳蜗边缘细胞,细胞角蛋白18表达阳性。北京正规鼠尾胶原哪家好
胶原蛋白是脊椎动物和无脊椎动物支持结构的主要组成。北京正规鼠尾胶原单价
酸解提取鼠尾Ⅰ型胶原及相对分子质量和浓度检测鼠尾肌腱在醋酸溶液的酸解作用下,其腱性组织被水解成胶冻状溶液,从而分解成鼠尾Ⅰ型胶原蛋白分子。抽取鼠尾Ⅰ型胶原150 μL滴在薄膜上,可形成液滴状胶原蛋白凝胶( ,其生物力学强度极差,一碰即散。将鼠尾胶原蛋白进行SDS-PAGE,结果显示:Ⅰ型胶原蛋白原液在相对分子质量130 000附近有明显条带,另一条带的相对分子质量大于170 000(图 2) 。胶原蛋白浓度为1.8 mg/mL。吸取矿化液倒入小培养皿中,将鼠尾Ⅰ型胶原纤维浸泡在矿化液中。矿化2、6 d后,分别将矿化后的Ⅰ型胶原纤维进行TEM和电子衍射观察。北京正规鼠尾胶原单价
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鼠尾胶原备用胶凝程序:1)在冰上放置以下物品:胶原蛋白I、无菌10×PBS、无菌蒸馏水、无菌1MNaOH。2)确定胶原蛋白I待使用溶液所需的较终浓度的体积。3)在冰上放置无菌管以收存胶原蛋白I。4)在无菌条件下执行以下步骤。4.1加入10×PBS(终体积/10)mL4.2计算要使用的胶原蛋白I的体积(不要添加到管中直到步骤4.6为止)终体积x终胶原蛋白I浓度(mg/mL)。4.3向10×PBS溶液中加入(要加入的胶原体积×0.023)mL的无菌冰冷1MNaOH。4.4向4.3溶液中加入下述体积的无菌冰冷蒸馏水:添加蒸馏水体积=V(终)—V(胶原蛋白)—V(10×PBS)—V(1MNaOH)4....