厦门细胞高效转染试剂供应商

细胞转染实验注意事项：1.如为贴壁生长细胞，一般要求在转染前一日，必须应用胰酶处理成单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，转染当日的细胞密度以70-90%（贴壁细胞）或2×106-4×106细胞/ml（悬浮细胞）为宜，较好在转染前4h换一次新鲜培养液。2.用于转染的质粒DNA必须无蛋白质，无RNA和其他化学物质的污染，OD260/280比值应在1.8以上。3.培养基中的血清在开始准备DNA和阳离子脂质体试剂稀释液时要使用无血清的培养基，因为血清会影响复合物的形成。其实，只要在DNA-阳离子脂质体复合物形成时不含血清，在转染过程中是可以使用血清的。通过缓冲液的作用以及脂质与内体膜融合，增大内体的内部渗透压。厦门细胞高效转染试剂供应商

细胞转染那些事儿：1.选择传代次数较低并处于对数生长期的细胞进行转染。对大多数细胞而言，均需要在转染当天或前现在铺板，第二天上午进行转染，48h后收集细胞进行功能检测。对于原代细胞，可用促有丝分裂刺激物进行细胞活化。2.对于贴壁细胞，一般要求在转染前一日，用胰酶处理为单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，较好在转染前4小时换一次新鲜培养液。3.支原体污染会严重降低细胞转染的效率，且支原体不会像细菌污染那么明显，因而转染前可用环丙沙星处理细胞以除去支原体。太原正规细胞高效转染试剂平均价格一类是瞬时转染，一类是稳定转染（很长转染）。

细胞转染常用步骤：1.转染试剂的准备①将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。②震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。2.选择合适的混合比例(1：1－1：2/脂质体体积：DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。3.将混合液在室温放置10―15分钟。4.吸去培养板中的培养基，用PBS或者无血清培养基清洗一次。5.加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。6.到时后，根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养24－48小时

细胞转染那些事儿：1.选择传代次数较低并处于对数生长期的细胞进行转染。对大多数细胞而言，均需要在转染当天或前现在铺板，第二天上午进行转染，48h后收集细胞进行功能检测。对于原代细胞，可用促有丝分裂刺激物进行细胞活化。2.对于贴壁细胞，一般要求在转染前一日，用胰酶处理为单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，较好在转染前4小时换一次新鲜培养液。3.支原体污染会严重降低细胞转染的效率，且支原体不会像细菌污染那么明显，因而转染前可用环丙沙星处理细胞以除去支原体。4.细胞转染时需要一定的细胞密度，以70-90%（贴壁细胞）或2×106-4×106细胞/ml（悬浮细胞）为宜。脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中。

DNA细胞转染步骤：1.提前现在细胞铺板提前现在将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞密度在60％左右为宜。2.转染过程⑴将0.8μg的DNA用25μl无血清稀释液稀释，充分混匀，制成DNA稀释液。注意：无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。⑵将2μlEntransterTM-H4000用25μl无血清稀释液体稀释，充分混匀，制成EntransterTM-H4000稀释液。室温静置5分钟。⑶将EntransterTM-H4000稀释液分别加入到DNA稀释液中，充分混匀（可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上），室温静置15分钟。转染复合物制备完成。⑷将转染复合物加入到含细胞和完全培养基的培养容器上，轻柔混匀。注意：①对本试剂，采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。②完全培养基可加物品。细胞转染是完成这一过程的必需步骤。厦门细胞高效转染试剂供应商

瞬时表达分析所需的人力和时间比稳定表达少。厦门细胞高效转染试剂供应商

转染的注意事项：细胞铺板密度用于转染的较佳细胞密度根据不同的细胞类型或应用而异。一般转染时，贴壁细胞密度为70%-90%，悬浮细胞密度为2×106-4×106细胞/ml时效果较好。确保转染时细胞没有长满或处于静止期。因为转染效率对细胞密度很敏感，所以在不同实验间保持一个基本的传代步骤很重要。铺板细胞数目的增加可以增加转染活性和细胞产量。在三种不同密度进行细胞铺板的比较表明铺板密度较高的，CAT活性也较高。得到较高活性所需的LIPOFECTAMINE试剂的量也相应增加了。这些结果说明，对于转染相同量的DNA所需的较佳阳离子脂质体试剂的量会因细胞密度而异厦门细胞高效转染试剂供应商