外泌体与肺病预后:外泌体mirRNA和蛋白质被认为是NSCLC的预后因子。Dejima等在研究NSCLC患者预后的生物标志物时发现,外泌体miR-4257和miR-21的含量显着上升。此外,还有研究表明,低水平miR-146a-5p的NSCLC患者较高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的复发率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血浆的外泌体时发现,NY-ESO-1是其中对低生存率有显着影响的标志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系统分析了28位NSCLC患者体内的365种miRNA,其中let-7f、miR-30e-3p和miR-20b表达均下调,进一步研究发现,let-7f和miR-30e-3p水平可以区分早期和晚期NSCLC患者,高水平let-7f和miR-30e-3p与不良预后密切相关。如何高效地提取外泌体是实现这项新兴液体活检技术临床常规化应用的关键外泌体的提取、分离方法:微流控技术。杭州正规外泌体提取试剂报价

外泌体(exosomes)是活细胞经过"内吞-融合-外排"等一系列调控过程而形成的膜性囊泡,来源于晚期核内体(也称为多囊泡体),直径约为30-150nm,密度在1.13-1.21g/ml,天然存在于血液、唾液、尿液及母乳等体液中,同时外泌体也存在于组织和细胞间隙中。人体中几乎所有类型的细胞均能产生外泌体,人体中大约有1014个外泌体,大约平均每个细胞产生1000-10000个。外泌体中含有核酸(DNA、miRNA、lncRNA、mRNA、tRF等)、蛋白和脂类,在细胞间物质和信息转导中发挥重要作用,研究表明其在干细胞、免疫调控、瘤转移、血管生成以及生物标志物等领域都发挥着不可替代的作用。石家庄正规外泌体提取试剂哪里买通过过滤膜对上述体液样本进行过滤,进一步去除体液中的细胞残片及其他杂质。

外泌体的提取主要包括以下几种方式。一是超速离心法,这是目前外泌体提取较常用的方法。此种方法得到的外泌体量多,但是纯度不足,电镜鉴定时发现外泌体聚集成块,由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准,也有一些研究认为此种方法得到的是微泡不是外泌体。二是过滤离心,这种操作简单、省时,不影响外泌体的生物活性,但同样存在纯度不足的问题。三是密度梯度离心法,用此种方法分离到的外泌体纯度高,但是前期准备工作繁杂,耗时,量少。外泌体检测作为一种新型的液体活检热点技术已被许多临床科研机构普遍地应用于一些病症和疾病的无创诊断。
外泌体的提取的方式:1、免疫磁珠法,这种方法可以保证外泌体形态的完整,特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备,但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性,不便进行下一步的实验。2、PS亲和法,该方法将PS(磷脂酰丝氨酸)与磁珠结合,利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似,获得的外泌体形态完整,纯度较高。由于不使用变性剂,不影响外泌体的生物活性,外泌体可用于细胞共培养和体内注射。2016.9《ScientificReports》杂志发表了该方法较新数据,表明PS法可提取相当高纯度的外泌体。六是色谱法,这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一,但是需要特殊的设备,应用不普遍。在超速离心力作用下,使蔗糖溶液形成从低到高连续分布的密度阶层,是一种区带分离法。

人体内多种细胞及体液均可分泌外泌体,包括内皮细胞、免疫细胞、血小板、平滑肌细胞等。当其由宿主细胞被分泌到受体细胞中时,外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。外泌体介导的细胞间通讯主要通过以下三种方式:一是外泌体膜蛋白可以与靶细胞膜蛋白结合,进而靶细胞细胞内的信号通路。二是在细胞外基质中,外泌体膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作为配体与细胞膜上的受体结合,从而细胞内的信号通路。有报道称一些外泌体膜上蛋白在其来源细胞膜上未能检测出。三是外泌体膜可以与靶细胞膜直接融合,非选择性的释放其所含的蛋白质、mRNA以及microRNA外泌体提取:磁珠法具有特异性高、操作简便、不影响外泌体形态完整等优点。厦门正规外泌体提取试剂哪家便宜
外泌体提取:基于聚合物的沉淀技术通常包括将样本与含聚合物的沉淀溶液混合。杭州正规外泌体提取试剂报价
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外泌体相关蛋白质与肺病的诊断:近年来,高通量质谱分析被普遍地应用于筛选NSCLC外泌体蛋白的研究,这为我们揭示了更多具有生物标志物价值的分子。Birgitte等采用微阵列芯片技术研究了431例肺病患者和150例对照者血浆外泌体中的蛋白表达情况,发现CD151、CD171和TSPAN8这三种蛋白表达不光能区分一些病症与正常组织,同时也能区分各种肺病的组织亚型。此外,联合应用这三种蛋白诊断NSCLC的AUC达到0.74。Clark等采用纳升液联用技术(nano-ESI-LC-MS/MS)分析了来自正常支气管上皮细胞系和两个携带NSCLC细胞系的外泌体的蛋白表达谱,从中筛选出如细胞外基质金属蛋白酶诱...