简介:鼠尾I型胶原蛋白(Collagenfromrattail,TypeI)系采用Birkedal-Hansen方法在无菌下制备,纯度达到95%以上,可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于细胞培养皿的包被,特别适合普通细胞培养器皿不易贴壁细胞的培养;也可用于制备三维胶原凝胶,使细胞在模拟的三维环境中生长。质量标准:1、SDS-PAGE分析纯度大于95%。2、无菌检验结果为阴性。3、本品2μg/cm2包被细胞培养皿后培养PC-12细胞,贴壁及生长正常。4、本品浓度1mg/mL,pH7.0时形成具有一定强度的三维胶原凝胶,NIH-3T3细胞在三维凝胶内生长正常、PC-12细胞在三维凝胶表面生长正常。我们不建议用过滤的方法无菌化。已经发现该方法会导致丢失蛋白。贵阳鼠尾胶原报价
鼠尾胶原的生物矿化和TEM观察:果冻样Ⅰ型胶原蛋白胶体初始浸泡在矿化液中时呈微白色;矿化2d后,胶体的颜色逐渐加深至乳白色;矿化6d后,随着羟基磷灰石晶体矿化长入胶原纤维内部,胶体颜色加深至纯白色,并在胶体表面沉积了一层薄薄的羟基磷灰石钙晶体,予镊子夹起,其表层羟基磷灰石钙晶体破碎散落。TEM表征显示:矿化2d后,Ⅰ型胶原纤维的明暗相隔周期性条纹结构逐渐模糊,羟基磷灰石钙前体渗入胶原纤维内部,胶原纤维部分矿化,沿着胶原纤维生长,忖度变深;矿化6d后,Ⅰ型胶原纤维的明暗相隔D-Band结构完全消失,胶原纤维内部可以看到黑色羟基磷灰石晶体,嵌入胶原纤维纵向生长。当鼠尾Ⅰ型胶原纤维完全矿化时,由于整条胶原纤维都被羟基磷灰石钙晶体占据,胶原纤维呈现黑色,选区衍射斑图符合羟基磷灰石表征。苏州正规鼠尾胶原鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/ml以上,pH 7左右时可形成具有一定强度三维胶。
一种海狸鼠尾胶原手术缝合线制备方法,其特征在于,步骤如下:(1)胶原纺丝液的配制:将备用的海狸鼠尾筋切成薄片,用无花果蛋白酶进行酶解处理,再用双氧水溶液杀酶;将杀酶后的切片用蒸馏水冲洗,然后用乙酸溶液溶胀,把溶胀后的切片分散搅拌,然后用滤网过滤,除去杂质及不溶胀物,然后把该溶液离心脱泡制得胶原纺丝溶液;(2)手术缝合线纤维的成形:将胶原纺丝液装入立式向上湿法纺丝机的纺丝液贮罐中,用氮气挤压入含有pH=8-11、质量浓度为50-80%的硫酸钠溶液的立式凝固浴中凝固成型,再经过质量浓度为60-90%的乙醇水溶液的脱水浴脱水,再经过假捻器加捻,合股后再进入含有pH=9-11、质量浓度为0.8-1.2%戊二醛的交联浴中交联,经过水浴水洗,再经第二次加捻,除去水及交联剂,干燥后,在卷绕辊上卷绕即得手术缝合线。
I型鼠尾胶原是借鉴NavneetaRajan,JasonHabermehl法,经过乙酸抽提、离心、灭菌、透析等步骤制备得到的高纯度、高活性胶原蛋白,属于医药级别产品,可用于包被细胞培养器皿(单分子层包被),适合多种类型细胞的贴壁如肝脏细胞、神经节细胞、胚胎细胞、肌细胞、肺细胞、神经鞘细胞等。I型胶原蛋白包被细胞培养板,规格为6/24孔板,表面经I型胶原蛋白包被,可以很好的降低蛋白质的吸附。使用这种细胞培养板培养细胞,可以获得良好的细胞贴壁率,细胞增殖速度快,形态均一,细胞培养成功率高。鼠尾胶原醋酸溶解:不建议用过滤的方法无菌化。
鼠尾胶原凝胶体在皮肤细胞原代培养中的应用:在国外的药理,毒理和皮肤病学的研究领域中已得到的限翩,否则培养成功率极低.本文采用鼠尾胶原凝胶体作为滋养层,提高了培养细胞的材料和方法r1]实验材料:培养液DEIdE(G皿}ao),表皮细胞生长因子(EGFSigma),小牛血清(上海祟明生物制品厂),氢化可的松,胰岛素(Sigm,青,链霉素,胰蛋白酶,]~DTA,细胞培养皿~35mill(00rningrSA).(2)皮肤基底细胞的分离和细胞悬液的制备:2~3d的新生大鼠(wisr),以75%酒精消毒背部皮肤,剪下皮肤后.以消化12h.轻刷表皮面,收集细胞悬液,加入细胞培养液.用梯度离心收集细胞,以3xi0/m]浓度接种平皿.(3)鼠尾胶原凝胶体的制备:具体方法参见文献c13o(4)培养皿的胶原铺制:i.0ml的酸溶解胶原滴入~35mm培养皿中,铺满平皿底部;将平皿暴露于氨气中30min,然后置空气中30rain,散尽剩余氨气。胶原蛋白是脊椎动物和无脊椎动物支持结构的主要组成。无锡鼠尾胶原报价
生物医用鼠尾胶原蛋白的提取方法,采用酸法与酶法相结合的工艺,保持恒低温无菌的环境。贵阳鼠尾胶原报价
鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用说明:不含细胞的三维胶原的制备(以配制1毫升,1mg/ml三维胶为例):将200ul鼠尾胶原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的离心管中,加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中(如果反过来把12ul0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入100ul10×PBS或10×培养液,混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用pH试纸测试)。将培养器皿在室温(25度左右)下放置20分钟待胶凝固后,转移到培养箱内。如果配制中使用的是10×PBS,使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。贵阳鼠尾胶原报价
鼠尾胶原实验应用:鼠尾胶原为底物的人鼻腔纤毛上皮细胞培养模式的建立目的建立以鼠尾胶原为贴附底物的人鼻腔纤毛上皮细胞的体外培养模式,为人鼻腔黏液纤毛运输系统的研究提供科学有效的方法.方法制备鼠尾胶原并铺片,以鼠尾胶原为贴附底物组织块培养法培养人鼻腔纤毛上皮细胞,培养7天时进行HE染色及扫描电镜和透射电镜观察细胞形态和结构,应用高速摄像技术测量纤毛摆动频率.结果鼠尾胶原要平坦均匀,平均厚度约为1mm;HE染色可见上皮细胞呈单层向周围爬开;扫描电镜下见纤毛上皮细胞呈不规则多角形,纤毛周围可见微绒毛;透射电镜下可见纤毛上皮细胞间为紧密连接;同一细胞任意两点纤毛摆动频率是相同的;同一来源体外培养的钩突和...