外泌体制备

人体内多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体，包括干细胞、免疫细胞、内皮细胞、血小板及平滑肌细胞等。外泌体被包裹在坚硬的双层膜中。双层膜保护外泌体的内容物，使外泌体能够在组织中长距离移动。干细胞外泌体因在上皮组织的增殖、迁移、再生、炎症和瘢痕控制等方面的作用，有望成为“无细胞的细胞治理”工具。干细胞来源的外泌体可通过囊泡，将干细胞的精华部分——mRNA、miRNA、IncRNA及蛋白质等生物活性物质，打包运出干细胞体外。通过“细胞间高速公路”来“快递”到人体各个组织内。干细胞外泌体可以有效活化提高细胞能量加速细胞排毒、淡化色斑。外泌体制备

建立记录各论文实验条件的数据库也可作为规避混乱的方法之一。一方面，随着EV研究倍受世界瞩目，各国启动了大型研究项目。美国启动NIH战略性大型项目（ExtracellularRNACommunication），国际厉害性学会——Gordon和KeystoneSymposia也从2016开始成立会议小组。受到欧洲药物研究开发公司“创新药物倡议组织（IMI）”的支持推进的CANCER-ID项目，也包含EV研究在内。2017年日本选定了EV研究为文部科学省研究开发战略的目标之一，期待会加速今后的研究发展。无论如何，今后EV研究的根本就是必须有强有力的研究方法和技术，而PS亲和法有望成为其中之一。血浆血清提取试剂盒方法外泌体提纯方法中，超速离心法和聚合物沉淀法（市售试剂盒）混入多种杂质。

在利用外泌体运输PTX进行抗中流的研究中，由于间充质干细胞可以归巢(homing)至中流细胞微环境并且可以不通过基因操作即可对PTX运输，因此Pessina等采用间充质干细胞SR4987作为分泌外泌体的母代细胞，而后将SR4987与PTX共混，使SR4987分泌的外泌体含有PTX，再利用超速离心法将载有PTX的外泌体分离出来，研究其对体外人胰腺ai细胞株的影响。结果表明外泌体可以有效的运载PTX并不破坏其功能，小泡(主要指外泌体)溶液的蛋白质浓度在0.047～0.095mg/mL之间时可以诱导中流细胞凋亡50%，这种抑制效果与纯PTX对体外ai细胞的抑制效果相当。

要使外泌体在临床上得以更加广fan的应用，仍然需要更加深入的研究:(1)外泌体的提纯方式主要是超速离心，这种提纯方式效率较低，耗费时间长并且相对昂贵，并不适宜在临床上应用。(2)外泌体虽然具有一定的靶向性，但这种靶向性较弱，不足以解决中流的靶向zhiliao问题。通过在外泌体表面表达特异性肽的方法可以为上述问题的解决提供较为有效的途径。(3)在外泌体的载药fang式方面，现在常用的电穿孔法虽更具优势，但往往会对外泌体或药物的完整性产生影响，转染外泌体法不能保证基因类药物全部进入外泌体内而不是粘附在外泌体表面，存在着安全隐患。(4)外泌体作为细胞分泌物质，其本身可调性并不如脂质体以及聚合物基药物载体。不同肝脏疾病中，细胞分泌的外泌体所携带的核酸和蛋白组分之间存在差异。

外泌体(Exosome)是由细胞分泌而来的微小囊泡，直径约为30-200nm，形态也呈现出多样性。microRNA(miRNA)是一种大小约21—23个碱基的单链小分子RNA，是由具有发夹结构的约70—90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成，不同于siRNA（双链）但是和siRNA密切相关。microRNA通过和靶基因mRNA碱基配对引导沉默复合体（RISC）降解mRNA或抑制mRNA的翻译，从而在转录后水平调控蛋白表达。microRNA在物种进化中相当保守，在动物、植物等中发现的microRNA表达均有严格的组织特异性和时序性。microRNA在细胞生长和发育过程中起多种作用，包括调控发育、分化、凋亡和增殖等。外泌体及其携带的组分参与肝脏细胞的增殖、再生和迁移等生理过程，在肝脏疾病和肝损伤中起着重要作用。外泌体制备

外泌体的形成始于细胞内陷，成熟于多囊泡胞内体，终于膜融合。外泌体制备

肺病细胞来源外泌体（LCC-exosome）可以通过刺激种瘤血管的形成来促进种瘤的生长。据相关报道称，LCC-exosome中的miR-210可以通过调节基质细胞中酪氨酸受体激酶A3的含量，促进种瘤血管的生成；而LCC-exosome中的miR-23a则可以通过开启脯氨酰羟化酶及压制紧密结合蛋白ZO-1来促进肺病的生血管作用。此外，有研究发现，外泌体中的内容物可以触发上皮-间质转化（EMT）。晚期肺病患者血清中外泌体波形蛋白表达增加，促使人正常支气管上皮细胞出现EMT，从而使肺支气管正常上皮细胞出现增殖，迁移能力。科学家也尝试利用外泌体的压制发病机制功能。外泌体制备