外泌体制备工艺

在20世纪80年代，外泌体被描述为从网织红细胞分泌的内体来源的囊泡。人们对这些细胞外囊泡的兴趣逐渐增加，因为它们似乎参与了很多细胞过程。外泌体携带蛋白质、脂质和RNAs，介导体内不同细胞类型之间的细胞间通讯，从而影响正常和病理状态。只有近，科学家才认识到将外泌体与其他类型的细胞外囊泡分开的困难，这排除了特定功能对不同类型分泌的囊泡的明确归因。为了阐明这个复杂但正在发展的科学领域，该综述着重于外泌体和其他分泌的细胞外囊泡的定义。讨论了它们的生物发生，分泌及其后续的命运，因为它们的功能依赖于这些重要过程。结果表明，PS亲和法可以检测到许多目前为止都无法检测的外泌体蛋白质和RNA。外泌体制备工艺

已经有许多关于外泌体作用的报导，根据这些现象实验中，从体液和培养上清中高纯度提取的高纯度外泌体，在活内是否真的能发生作用尚未能确定。确认外泌体生理作用的单独方法就是明确外泌体的释放机制，通过促进或压制释放机制，分析会引起何种生理作用，这是进一步研究的发展方向。甚至活内的外泌体动态（哪个外泌体迁移至何处）也会成为今后需要努力研究的重要课题。实际上，用PS亲和法提取的人白血病细胞释放的外泌体，其纯度与超离心法和PEG沉淀法提取外泌体做比较，PS亲和法提取的外泌体，其蛋白特异性检测可高出10~100倍以上，几乎没有混入外泌体以外的蛋白，回收量高，操作重复性好。外泌体可视化研究因外泌体内含mRNA、microRNA等核酸和蛋白质对相邻细胞具有交换信息的功能。

在利用外泌体运输PTX进行抗中流的研究中，由于间充质干细胞可以归巢(homing)至中流细胞微环境并且可以不通过基因操作即可对PTX运输，因此Pessina等采用间充质干细胞SR4987作为分泌外泌体的母代细胞，而后将SR4987与PTX共混，使SR4987分泌的外泌体含有PTX，再利用超速离心法将载有PTX的外泌体分离出来，研究其对体外人胰腺ai细胞株的影响。结果表明外泌体可以有效的运载PTX并不破坏其功能，小泡(主要指外泌体)溶液的蛋白质浓度在0.047～0.095mg/mL之间时可以诱导中流细胞凋亡50%，这种抑制效果与纯PTX对体外ai细胞的抑制效果相当。

间充质干细胞存在于骨髓、脂肪、脐血、牙髓、滑膜液等部位，是一种能够自我更新的多功能干细胞。间充质干细胞通过旁分泌的形式发挥其生理功能，而外泌体作为一种细胞间传递信息的介质，在间充质干细胞的功能行使中发挥了重要作用。研究发现间充质干细胞来源的外泌体能够修复组织损伤、抑制中流生长和调节免疫响应，具有zhiliao心肌梗死、自身免疫疾病、阿尔兹海默症等疾病的潜力。另外，也有研究显示间充质干细胞来源的外泌体会促进某些中流生长。泌体是细胞内源性的小囊泡，由大多数细胞分泌。

虽然系统递送的外泌体主要在肝脏、肾脏和脾脏中积累，但通过在外泌体的外表面上展示特定的靶向分子。例如，识别靶抗原的肽或抗体片段，可以获得靶向外泌体；通过在细胞分泌囊泡上展示糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定的纳米抗体，可以使细胞分泌囊泡显示多种蛋白，包括抗体、荧光蛋白和信号分子。自然分泌的外泌体分离纯化直接作为药物的潜力有限，但是，将自然的外泌体分泌所需组分掺入合成脂质体或纳米颗粒中，并且使用可控程序组装后的工程化外泌体模拟物在药学上拥有更大的应用潜力。随着今后的研究发展，外泌体功能逐步清晰，并扩大临床应用。细胞提取试剂盒成分

外泌体可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化等方方面面。外泌体制备工艺

外泌体在心脏修复中起着关键作用。外泌体通过内含的miRNA直接调控基因表达，将信息传递给靶细胞。尽管干细胞移植治理是一种很有前景的修复损伤心脏组织并使其再生的辅助手段，但由于缺血心脏中移植细胞的存活状况不佳，一般只能观察到心脏功能的轻度改善。近期的研究表明，干细胞释放的外泌体可以作为心脏修复潜在的无细胞治理剂。干细胞分泌的外泌体相比干细胞有如下优点：（1）旁分泌效应，外泌体作为干细胞旁分泌作用的一种媒介；（2）组合起效，外泌体可与现有的组合物或方法进行组合；（3）个性化，外泌体可改造特定活性成分；（4）靶向特异性，外泌体被工程化改造后，具有靶向特定细胞类型或组织的功能；（5）安全性高，外泌体治理属于无细胞疗法。外泌体制备工艺