b-actin和外泌体

外泌体的基本信息：1、外泌体的大小：外泌体的直径约40-150nm。2、从研究上来讲并不太严格区分外泌体或微泡。3、外泌体属于胞外囊泡类，除了外泌体之外细胞还分泌微泡以及其它的膜囊泡。4、外泌体的直接比微泡的要小，后者直径为100nm-1μm。5、外泌体的数量：人体中大约有1014个，近乎于平均每个细胞产生1000-10000个。6、外泌体的细胞源：人体中几乎所有类型的细胞均能产生外泌体。7、外泌体具有异质性，即使是同一种细胞分泌的外泌体都有可能具有比较大功能区别。8、外泌体的存在：外泌体几乎存在于所有的组织、细胞间隙、体液中。9、外泌体产生于细胞中的多泡体。外泌体中含有核酸，包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA。b-actin和外泌体

外泌体的提取、纯化和鉴定：每一个外泌体研究者较初都要为外泌体的分离提取而烦恼。选择的分离方式是利用超速离心的方式分离外泌体，并且可以选用梯度密度离心法得到纯度更高的外泌体。另外利用外泌体自身的物理化学性质所研发的各种市售的外泌体分离提取试剂盒也能达到分离效果。提取的外泌体的鉴定方式主要是通过形态学（电子显微镜技术）、粒子大小以及标志蛋白等方式实现的。近来的研究发现外泌体在比较多生理病理上起着重要的作用，如免疫中抗原呈递、瘤子的生长与迁移、组织损伤的修复等。不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能，可作为疾病诊断的生物标志物。外泌体具有脂质双层膜结构，能比较好的保护其包被的物质，且能靶向特定细胞或组织，因此是一种比较好靶向给药系统。腹水外泌体融合实验外泌体的膜蛋白有可能与细胞膜蛋白作用，活跃细胞内通路。干细胞外泌体miRNA测序需要开发大规模生产质量可控的外泌体并快速纯化外泌体的技术和策略。

透射电子显微镜（TEM）和扫描电子显微镜（SEM）是用于评估外泌体形态、大小和表型的的两种常见的电子显微镜。SEM和TEM均使用电子束产生高分辨率的亚微米颗粒放大图像，以区分外泌体与残留在样品中相似大小的非外泌体颗粒，该方法还可用于检查样品的纯度。TEM与SEM之间的区别在于检测电子类别，在SEM中，电子与样品中的粒子相互作用时会发生散射，捕获并检测散射的电子，从而生成粒子图像。但是，在TEM中，不与粒子相互作用的电子穿过样品，并使用荧光屏进行检测。电子显微镜下外泌体大小不一，通常呈茶托样的圆形或椭圆形。采用电子显微镜检测外泌体时对样品的预处理和制备要求较高，外泌体的提取方法和品质会对电镜结果造成影响；另外样品的准备阶段比较复杂，不适合进行大量快速的测量；而且由于样本经过了干燥、固定以及冷冻等预处理和制备过程，对生物样本的结构会造成一定的破坏，从而影响观察的效果，无法准确测量外泌体浓度。安徽植物外泌体鉴定磁珠免疫法分离的外泌体，生物活性易受pH和盐浓度影响，不利于下游实验，难以普遍普及。

常规生物学实验中，实时定量PCR技术（RT-PCR）普遍用于microRNA的检测实践中，但外泌体样品中的microRNA丰度极低，普通RT-PCR技术的灵敏度已经不能够满足。第三代微滴式数字PCR——ddPCR技术，成为外泌体microRNA检测的选择技术。微滴式数字PCR（DropletdigitalPCR），又成为“油包水PCR”，在传统的PCR扩增前对样品进行微滴化处理，即将含有核酸分子的反应体系分成成千上万个纳升级的微滴，其中每个微滴或不含待检核酸靶分子，或者含有一个至数个待检核酸靶分子。经PCR扩增后，逐个对每个微滴进行检测，有荧光信号的微滴判读为1，没有荧光信号的微滴判读为0，根据泊松分布原理及阳性微滴的个数与比例即可得出靶分子的起始拷贝数或浓度。外泌体膜含有MHC-1/2蛋白，能绑定特异性的肽链。

磁珠免疫法分离外泌体：将针对目的抗原的抗体通过生物素-链霉亲和素连接到磁珠表面，然后将磁珠与样品共孵育，使外泌体特异性结合到磁珠上形成磁珠-外泌体复合物，再用蒸馏水或者PBS冲洗，结尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脱获得外泌体。该方法相对于ELISA的好处主要是，珠粒提供了更大的表面积来捕获外泌体，从而提高了分离效率。此外，使用磁珠时，样品起始体积没有上限，而基于微孔板的ELISA分析的较大样品体积为100μL，且ELISA洗脱杂质时容易造成孔间交叉污染。当将磁珠法与金标准外泌体分离方法进行比较时，磁珠法可分离出更纯净的外泌体，特异性高、速度更快，并且不需要昂贵的仪器。另外，与其他分离方法（如超速离心或超滤）相比，磁珠法不影响外泌体形态。但是采用磁珠法时，外泌体生物活性易受PH和盐浓度影响。外泌体的数量：人体中大约有1014个，近乎于平均每个细胞产生1000-10000个。巨噬细胞外泌体

外泌体普遍存在于细胞培养上清以及各种体液中，包括血液、唾液、尿液、乳汁等。b-actin和外泌体

胞外囊泡和外泌体的异质性。细胞外囊泡的两大类是胞外体和外泌体。胞外体通过质膜出芽释放，大小在50~1mm之间。外泌体起源于内泌体途径，通过形成包含ILVs的ESEs、LSEs，较终形成多泡体。当MVBs与质膜融合时，外泌体释放(尺寸范围~40~160nm)。外泌体是一个高度异质性的群体，具有独特的诱导复杂生物学反应的能力。外泌体的异质性可以根据其大小、含量(载物)、对受体细胞的功能影响以及细胞来源来概念化。这些特征的不同组合导致了外泌体的复杂异质性。b-actin和外泌体

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